T 细胞疗法是攻克难治肿瘤的突破性方案，CAR-T、TIL、异体通用 T 细胞多条技术路线齐头并进，覆盖血液肿瘤、肺癌、黑色素瘤、消化道肿瘤等高发癌种，同时在抗病毒、自身免疫疾病领域展现出广阔应用前景，是当下细胞治疗产业的核心增长引擎。
然而传统培养模式产能有限、放大困难，严重限制细胞药物商业化落地。
388vip太阳集团官网基于0.5 L - 3 L 反应器系统+一次性罐体，搭建标准化 T 细胞连续扩增工艺，成功实现小试到中试线性放大，细胞增殖效率、功能表型全程稳定，最终细胞扩增1131.75倍。为大规模高效制备临床级 T 细胞提供成熟设备与工艺一体化高效解决方案。
本次实验使用CD4+T细胞（上海星华生物）、CloudReady云平台生物反应器 0.5L、Opti-Cell mini平行生物反应器、Endura SUB 一次性反应器 3L。（图1、图2）
表1 CloudReady 云平台生物反应器 0.5L
表1 Opti-Cell mini 平行生物反应器 3L
在0.5L Cloudready接种细胞密度为1×105cells/mL，培养10天后转移部分细胞作为3L（Endura SUB一次性罐体） Opti-Cell mini的种子细胞，接种密度同样设置为1×105cells/mL，进行T细胞的连续及放大培养。
工艺参数设置如下（表一），其中DO由氧气的通气速率级联控制，pH由二氧化碳（酸）通气速率级联控制。前期通气方式为表通，后期切换为底通。在完整的培养周期中，各参数控制均可靠且稳定。
在第11天时，将CloudReady罐内一半细胞及培养基转移至新罐体，并以新鲜培养基将工作体积补至300 mL，培养规模拓展为两个0.5 L罐体。（图1）
3 L一次性反应器系统（Opti-Cell mini+Endura SUB）初始工作体积为900 mL，第5天补充培养基600 mL，第7天补充培养基600 mL，达到最大工作体积2.1 L，随后根据培养情况进行换液操作。
培养过程中0.5 L和3 L罐体（Endura SUB一次性反应器，388vip太阳集团官网）T细胞的增殖曲线如图3，图4所示，0.5 L培养体系经过补/换液、罐体转移等步骤，培养17天，最高细胞密度达到1.2×107 cells/mL，细胞活率维持在90%以上，总细胞数扩增360倍。
图3 细胞生长曲线及活率变化曲线
（上方图片：0.5L；下方图片：3L）
3 L培养体系（Endura SUB一次性反应器，388vip太阳集团官网）经过补/换液等步骤，培养15天，最高细胞密度达到7.35×106 cells/mL，总细胞数扩增171.5倍，细胞活率维持在90%附近。在25天总培养周期内，经过生物反应器连续扩增培养，最终获得T细胞数为2.26×1010个，细胞扩增1131.75倍，实现了T细胞在搅拌式生物反应器上的快速连续扩增培养，也验证了Endura SUB一次性生物反应器在提高研发效率，合规方面的显著优势。
图4 总细胞扩增倍数
（上方图片：0.5L；下方图片：3L）
图5 T细胞生长形态
（A:平皿培养，B：0.5 L生物反应器培养，C：3 L一次性生物反应器培养）
图6 T细胞流式检测结果
（A：0.5 L生物反应器培养，B：3 L一次性生物反应器培养）
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